气相色谱仪测定婴幼儿乳粉脂肪酸组成

2019年06月12日 标签:

婴幼儿乳粉

一、概述

婴幼儿乳粉是根据不同生长时期婴幼儿的营养需要进行设计的,以奶粉、乳清粉、大豆、饴糖等为主要原料,加入适量的维生素和矿物质以及其他营养物质,经加工后制成的粉状食品。其营养均衡全面,营养成分接近母乳,是母乳的替代品。必需脂肪酸膳食补充已成为婴幼儿营养的世界性标准,添加了必需脂肪酸的新一代婴幼儿配方奶粉与传统婴幼儿配方奶粉相比,在促进婴幼儿正常发育方面具有无可比拟的优势,能得到消费者更多的喜爱。其中添加的脂肪酸是作为营养强化剂添加的,但由于营养强化剂大多都有安全阈值,因而在婴幼儿配方食品中对脂肪酸含量有严格的要求,婴幼儿配方食品中脂肪酸检验要求较高,对其实现快速、准确的检验有着特殊的意义。本实验将婴幼儿奶粉样品经酸水解后利用提取剂提取出脂肪经甲基化反应后,用气相色谱仪测定婴幼儿乳粉脂肪酸组成,样品处理方法简单快捷,易于操作,方法重现性良好。


二、气相色谱仪测定婴幼儿乳粉脂肪酸组成实验材料与仪器准备

1、试剂

异辛烷、甲醇、正庚烷皆为色谱纯;实验用水为密理博超纯水仪制的超纯水;其余所用试剂均为分析纯;脂肪酸甲酯标准品(37种)、十三烷酸甲酯标准品。


2、仪器准备

气相色谱仪6891N(南京科捷分析仪器有限公司)、冷冻高速离心机(美国ThermoFisher公司);涡旋混合仪;超声波清洗仪(南京科捷分析仪器有限公司)、旋转蒸发仪。


三、气相色谱仪测定婴幼儿乳粉脂肪酸组成实验方法步骤

1、样前处理

准确称取婴儿配方奶粉样品10.0000g置于250mL具塞三角瓶中,加25mL水加热溶解,混匀后再加20mLHCl溶液(浓盐酸先用等体积的水进行稀释)摇匀。将摇匀后样液放置在附带加热功能的超声波清洗仪中,90℃超声提取30min。取出后加入20mL乙醚,冷却后加入20mL乙醇加塞超声提取5min,后再加入25mL石油醚,超声提取5min,振摇后离心静置,将有机层转入烧瓶中。再分别萃取2次,后两次每次加入的试剂为15mL乙醚、10mL乙醇、15mL石油醚,操作方法同第1次萃取。把提取的所有有机层合并,减压浓缩至近干,用异辛烷溶解残留物并定容至5mL,摇匀,加1mL十三烷酸甲酯内标溶液,吸取2mL氢氧化钾甲醇溶液,超声振摇25min,进行甲基化反应。如果有机层有浑浊,可离心至澄清,此有机层为样品待测液。


2、溶液配制

脂肪酸甲酯混合标准溶液:称取适量脂肪酸甲酯标准品(精确到0.0001g),用异辛烷配制成1mg/mL脂肪酸甲酯混合标准液,在-18℃条件下保存。十三烷酸甲酯标准溶液:称取适量十三烷酸甲酯标准品(精确到0.0001g),用异辛烷配制成1mg/mL溶液。氢氧化钾甲醇溶液:称取一定量的氢氧化钾,用无水甲醇配制成5mol/L氢氧化钾甲醇溶液。标准品混合溶液:取脂肪酸甲酯混合标准品配成0、

10、20、40、80、100µg/mL标准溶液,内加1mL内标十三烷酸甲酯。


3、气相色谱仪实验条件

进样口温度:250℃;

载气流速:1.0mL/min;

进样量:1µL。

分流比:30:1;

色谱柱:CD-2560

毛细管色谱柱(100m×0.25mm,0.2µm);

检测器温度:260℃;

柱温:140℃保持5min后以4℃/min速率升温至240℃;


四、实验图谱

气相色谱仪测定婴幼儿乳粉脂肪酸组成图谱

从上图可知,通过检测发现奶粉样品中的脂肪酸成分主要为7种:γ-亚麻酸、亚油酸、α-亚麻酸、共轭亚油酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)等。因此,本实验重点研究此7种脂肪酸检测。


五、实验结果分析

取20µg/mL的7种脂肪酸混合标样,进样量为1µL,测得信噪比,检测限以10倍噪声计算,以5.0g称样量,最后定容体积为10mL,进样量1µL计,得出常见的几种脂肪酸即γ-亚麻酸、花生四烯酸、α-亚麻酸、EPA、亚油酸、共轭亚油酸、DHA检出限皆为0.1mg/100g,远远低于GB 5413.27—2010《食品安全国家标准:婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定》中规定的0.5mg/100g要求。


采用的样品处理方法以及仪器检测方法线性好。加标回收率在86.4%~103.9%和精密度实验结果表明样品检测相对偏差在0.91%~3.82%,而且与GB5413.27—2010《食品安全国家标准:婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定》标准中的方法相比:既能够获得标准中规定的检测限,又使得操作过程变得简易可行,且样品中待测组分的分离度很好,能够同时测定婴幼儿乳粉中的脂肪酸成分,此方法更适合在基层实验室推广。